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一抗: 可以特異結合底物,就是識別出我們想要檢測的東西。一抗和底物結合與否用肉眼是看不出來的。
一抗的選擇要點:
1. 一般單克隆抗體特異性強,但親和力相對小,檢測抗原靈敏度相對低;而多克隆抗體特異性弱,但抗體的親和力強,靈敏度高,但易出現(xiàn)非特異性染色(可通過封閉來避免)。
2. 抗體的比例可依據(jù)抗體說明書或western blot的抗體比例來做即可。3. 對于組織樣本,一般要在37℃孵育1-2h 或4℃冰箱孵育*(效果*,且拿出后需37℃復溫45min),并保持濕盒里的濕度來防止抗體蒸發(fā)。對于難以著色的,在第二天還需將濕盒置于室溫孵育。
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